початок розділу Виробничі, аматорські радіоаматорські Авіамодельний, ракетомодельного Корисні, цікаві	хитрощі майстру електроніка фізика технології винаходи	таємниці космосу таємниці Землі таємниці Океану хитрощі Карта розділу
Використання матеріалів сайту дозволяється за умови посилання (для сайтів - гіперпосилання)

ВИНАХІД
Патент Російської Федерації RU2205658

СПОСІБ КОРЕКЦІЇ біохімічних І імунологічні ПОРУШЕНЬ В УМОВАХ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ ГОСТРОЇ ТОКСИЧНУ гепатопатіях, супроводжується підвищенням ІМУНОЛОГІЧНОЇ РЕАКТИВНОСТІ

Ім'я винахідника: Смахтін М.Ю .; Конопля О.І .; Северьянова Л.А .; Бобинцев І.І.
Ім'я патентовласника: Смахтін Михайло Юрійович; Конопля Олександр Іванович
Адреса для листування: 305041, г.Курск, вул. К. Маркса, 3, КДМУ, патентний відділ, З.М. Купріянової
Дата початку дії патенту: 2002.02.11

Винахід відноситься до медицини, а саме до гепатології та імунології, і стосується розробки способу корекції біохімічних і імунологічних зрушень в умовах експериментальної гострої токсичної гепатопатии, що супроводжується підвищенням імунологічної реактивності. Для цього експериментального тварині вводятьпарентерально (внутрішньочеревно) розчинений у фізіологічному розчині хлориду натрію трипептид H ₂ N-Gly-L-His-L-Lys-COOH в дозі 1,5 мкг / кг маси тіла десятикратно з інтервалом в 24 ч між ін'єкціями. Спосіб забезпечує купірування гіперактивації імунної системи, що перешкоджає розвитку аутоімунного процесу.

ОПИС ВИНАХОДИ

Пропонований спосіб відноситься до медицини, а саме до гепатології та імунології, і може бути використаний для корекції і профілактики біохімічних і імунологічних зрушень при токсичних гепатопатіях.

Реактивність імунної системи при різних формах патології печінки відіграє істотну роль в патогенезі захворювання, що обумовлено безпосереднім впливом імунної системи організму на розвиток аутоімунних ускладнень токсичних та інфекційних уражень печінки, на перехід гострої форми захворювання печінки в хронічну і в цироз печінки (Логінов А.С. імунологічні аспекти хронічних захворювань печінки. // Wiss. Beitr. M.- Luther-Univ. Halle-Wittenberg R.-1987.- 99.-Р.192-198.), а й у підтримці хронічного перебігу патологічного процесу (Яхонтова Про .І., Карашурова Л. Л., Старкова С.А. Деякі імунологічні зміни і їх діагностичне значення при хронічних захворюваннях печінки. // Врачеб. справа. -1988.- 4.-С. 39-42.) Багато питань зв'язків печінки та імунної системи вирішуються в експерименті при моделюванні патологічного процесу в печінці за допомогою різних гепатотропних речовин (Алексєєва І.М., Бризгіна Т.М., Павлович С.І., Ільчевіч Н. В. Печінка і імунологічна реактивність. -Київ: Наук. думка, 1991.-С.5). Реакція імунної системи залежить не тільки від шкідливого агента, але і від його дози, кратності та способу введення в організм. В умовах токсичних гепатопатий можна очікувати як зниження імунологічної реактивності (Молотков А.О. Порушення фізіологічних механізмів регуляції системи імунітету при гострому отруєнні фосфорорганічних з'єднанням карбофосом: Автореф на здобуття уч. Ступеня канд. Мед. Наук. - Саратов, 2002.-С. 20 ), так і її підвищення (Конопля А.І. Ендогенні імуномодулятори як фактор збереження гомеостазу при патології печінки: Автореф. дис. на здобуття уч. ступеня д-ра мед. наук. - Київ, 1989.-С.39). Така дисфункція в імунній системі вимагає відповідної імунокорекції (Алексєєва І.М., Бризгіна Т.М., Павлович С.І., Ільчевіч Н.В. Печінка і імунологічна реактивність. -Київ: Наук. Дум-ка, 1991. - С.43-45). Вона може бути ефективною тільки за умови суворого обліку стадії захворювання, характеру і ступеня імунних порушень. Оскільки в умовах токсичних гепатопатий може спостерігатися різна реакція імунної системи, показана ефективність лікування в одних випадках імуностимуляторами, а в інших - иммунодепрессантами. Імуностимулятори ефективні в боротьбі з імунодефіцитами, що спостерігаються при деяких формах патології печінки, і для активації регенераторних процесів в органі. Але використання імуностимуляторів (тимогена) в умовах патології печінки саме з підвищеною реактивністю імунної системи і високим рівнем імуноглобулінів в крові часто призводить до загострення патологічного процесу (Б.І. Кузник, В.Г.Морозов, В.Х. Хавінсон. Цітомедіни 25- річний досвід експериментальних і клінічних досліджень. Санкт-Петербург.- "Наука" .- 1998.-С.197-198.). Імуносупресори показані для того, щоб уникнути шкідливої ​​дії імунних механізмів на печінку (Алексєєва І.М., Бризгіна Т. М., Павлович С.І., Ільчевіч Н.В. Печінка і імунологічна реактивність. - Київ: Наук. Дум-ка , 1991.-С.43), оскільки активація імунної відповіді може свідчити про запуск аутоімунних механізмів пошкодження печінки (Там же, С. 77).

Найбільш близьким способом корекції в умовах гострого токсичного ураження печінки CCL ₄ (тетрахлорметаном (ТХМ), інша назва чотирихлористий вуглець (Чху), є застосування полисахаридного комплексу, витягнутого з коренів і кореневищ комірника шестілепестная (ПСК ЛШ), що володіє імуносупресорної активністю (Мансімова О. В. Автореф. дис. на здобуття уч. ступеня кандидата медичних наук. Курськ, 1999, С.12-16). У полісахаридних комплексів кореневищ і коренів комірника шестілепестная міститься глюкози - 13,6%, Арабіноза - 8,5%, ксилози -%, галактози -%, манози - 3,5%, рамнози - 7,1%. В умовах підвищеної імунологічної реактивності, викликаної введенням CCL _4, ПСК ЛШ проявляє істотний иммунокорригирующий ефект, тобто знижує підвищену імунологічну реактивність до рівня здорових тварин. така нормалізація імунологічної реактивності супроводжується і зменшенням вираженості біохімічних симптомів ураження печінки: синдроми цитолізу (активність аланін і аспартатамінотрансферази), холестазу (концентрація білірубіну, холестерину) і гепатодепрессівного синдрому (концентрація фібриногену), що свідчить про поліпшення стану печінки. Таким чином, в цьому способі корекції обмежується гіперактивація імунної системи, яка може привести до розвитку аутоімунних ускладнень, хронізації процесу і погіршення стану печінки, але і імунодефіцит не виникає, так як реактивність імунної системи знижується до рівня здорових тварин, але не нижче нього.

Недоліком такого способу корекції є трудомісткість отримання ПСК ЛШ, труднощі в його стандартизації, оскільки процентний вміст діючих речовин в ПСК ЛШ може залежати від якості первинної сировини і умов виділення, крім того, не ясно, що є основною діючою речовиною в цьому комплексі, від чого залежать його ефекти - від точного процентного вмісту моносахаров або їх послідовності в полисахаридах.

Завдання винаходу - розробити спосіб корекції біохімічних і імунологічних зрушень в умовах експериментальних гострих токсичних гепатопатий, що супроводжуються підвищенням імунологічної реактивності.

Завдання винаходу досягається тим, що експериментальному тварині (щура) з токсичної гепатопатіях, що супроводжується підвищеною імунологічної реактивності, вводятьпарентерально (внутрішньочеревно) розчинений у фізіологічному розчині (ФР) хлориду натрію супрессірует імунну відповідь трипептид H ₂ N-Gly-L-His-L- Lys-COOH (хімічна назва - glycyl-L-histidyl-L-lysine) (надалі позначається як Gly-His-Lys) в дозі 1,5 мкг / кг маси тіла десятикратно, з інтервалом в 24 ч між ін'єкціями.

У розробленому нами способі корекції використовується трипептид, що володіє слабким імуносупресивні ефектом, і підібрана така доза і кратність його введення, що, не викликаючи імунодефіциту, він обмежує гіперактивацію імунної системи. Можна стверджувати, що така иммунокоррекция позитивно впливає на стан печінки, так як зменшується вираженість біохімічних симптомів її поразки (синдром запалення і частково холестазу).

Цей пептид виділений з плазми крові і відомо його стимулюючий вплив на ріст волосся, синтез колагену фібробластами, накопичення міжклітинної речовини сполучної тканини, ніж багато в чому пояснюється прискорене загоєння ран і виразок під його впливом і на підставі чого висловлюються припущення про фізіологічну роль цього пептиду, як про стимуляторе ранозажівленія (Maquart FX, Pickart L., Laurent M., Gillery P., Monboisse JC, Borel JP. Stimulation of collagen synthesis in fibroblast cultures by the tripeptide -copper complex glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu ^{2 +.} // FEBS Lett. 1988. Vol. 238. N2. P.343-346; Trachy RE, Fors TD, Pickart L., Uno H. The hair follicle-stimulating properties of peptide copper complexes. Results in C3H mice. // Ann. NY Acad.Sci. 1991. Vol. 642. P.468-469.) Gly-His-Lys пов'язує двовалентну мідь і таким чином може брати участь в активації медьсодержащих ферментів, тим самим забезпечуючи антиокислювальні процеси, біоенергетику клітин, синтез еластину, колагену, катехоламінів (Maquart FX, Bellon G., Chaqour В., Wegrowski J, Patt LM, Trachy RE, Monboisse JC, Chastang F, Birembaut P, ​​Gillery P. In vivo stimulation of connective tissue accumulation by the tripeptide-copper complex glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu ^2+. // J. Clin. Invest. 1993. Vol 92. N5. P. 2368-2376; Linder MC Biochemistry of Copper. E. Freiden, Ed. Plenum Press. 1991).

На даний момент, оскільки точно відома хімічна формула цього пептиду, він може бути синтезований в будь-якій лабораторії синтезу пептидів або куплений у фірм, що займаються постачанням біологічно активних сполук (Sigma, ICN, Merk, Bachim і ін.). Нами був використаний препарат, синтезований в НДІ хімії Санкт-Петербурзького Державного Університету.

На кресленні представлена ​​гістограма, що демонструє иммунокорригирующий ефект пептиду Gly-His-Lys, в умовах токсичного ураження печінки тетрахлорметаном.

Спосіб здійснюється наступним чином. В якості моделі гострої токсичної гепатопатии (ОТГ), що супроводжується стимуляцією імунологічної реактивності, нами була обрана модель гепатопатии, викликаної отруєнням тетрахлорметана (ТХМ), оскільки саме ця модель має великий схожістю механізмів розвитку ураження печінки з клінічними формами гострої, хронічної гепатопатии і цирозу печінки різної етіології у людей (Блюгер А.Ф., Майорі А.Я., Горштейн етиловий спирт і ін. Характеристика порушень цілісності мембран клітин печінки при деяких видах ураження органу. // Успіхи гепатологии. / Под ред. А.Ф. Блюгер .-Ріга.-1981 Вип.9.-С.5-24.). Експериментальним тваринам (щури), внутрішньом'язово вводили 50% розчин ТХМ в рослинній олії в дозі 3 мл / кг маси тіла протягом 5 днів поспіль. Одночасно з надходженням гепатотропного отрути, до і після нього, десятикратно (один раз на добу), внутрибрюшинно вводять 0,1 мл розчину, що містить пептид Gly-His-Lys в дозі 1,5 мкг / кг маси, розчинений в стерильному Ізотонічність розчині хлориду натрію. При такій кратності введення пептид має коригуючі дією відносно ряду біохімічних показників, таких як рівень бета-ліпопротеїдів і вираженість тимолової проби, а й слабким іммуносупрессірующім ефектом, який, суттєво не послаблюючи функції імунної системи, перешкоджає подальшому підвищенню імунологічної реактивності, що може привести до гіперактивації і можливого розвитку аутоімунних ускладнень. При введенні пептиду в тій же дозі, але п'ятикратно нормалізує біохімічні зрушення ефект менш виражений, а підвищена в умовах отруєння ТХМ імунологічна реактивність практично не знижується. Перевищення рекомендованої дози більш ніж в 10 разів (дози 50 і 150 мкг / кг) супроводжується більш вираженим супрессірует ефектом пептиду і одночасним посиленням біохімічних порушень, таких як активність аланін і аспартатамінотрансферази, концентрації білірубіну, і бета-ліпопротеїдів в крові, а й вираженість тимолової проби, що свідчить про погіршення функціональної активності гепатоцитів.

Приклад конкретного виконання

Щури Вістар були розділені на групи по 8-10 щурів у кожній. Групи тварин представлені в таблиці 1. Пептид Gly-His-Lys вводився тваринам десятикратно (один раз на добу) внутрибрюшинно в дозі 1,5 мкг / кг маси і в 100 разів більшою дозі - 150 мкг / кг. ОТГ викликали шляхом п'ятикратного (один раз на добу) внутрішньом'язового введення 50% розчину ТХМ в рослинній олії в дозі 3 мл / кг маси, чергуючи лапи. Пептид вводився до і одночасно з введенням ТХМ. На наступний день після останнього введення ТХМ щурів забивали знекровленням під ефірним наркозом, отримували сироватку крові, яку використовували для біохімічних досліджень. В умовах ОТГ спостерігається підвищення активності аланін - і аспартатамінотрансферази, рівня білірубіну, бета-ліпопротеїдів і тимолової проби, що свідчить про ураження печінки і розвитку синдромів цитолізу, холестазу і запалення. У цих умовах виявлялося коригуючий дію пептиду в дозі 1,5 мкг / кг маси на концентрацію бета-ліпопротеїдів і рівень тимолової проби, а й спостерігалася тенденція до нормалізації щодо інших біохімічних показників, в той час як використання пептиду в дозі 150 мкг / кг маси призводило до посилення біохімічних порушень (таблиця 1).

Такі ж групи тварин були взяті для вивчення стану імунологічної реактивності. Про інтенсивність гуморального імунної відповіді (ГИО) судили за кількістю антителообразующих (АОК) і розеткообразующіх (РОК) клітин в селезінці на 5-й день після імунізації експериментальних тварин (щури) (Мальберг К., Зігле Е. Імунологічні методи. / Под ред. Г. Фримель; Пер. з нім. А.П. Тарасова. - М., 1987-с.273-282.). В якості антигену використовували еритроцити барана (ЕБ). Пептид вводився як до, так і після імунізації за схемою в табл.2

Результати експерименту представлені на кресленні. Введення ТХМ супроводжується розвитком ОТГ і стимуляцією ГИО на Т-залежний антиген-ЕБ. Введення пептиду в цих умовах знижує імунологічну реактивність, що може бути використано для цілей імунологічної корекції.

Таким чином, використання пропонованого трипептида в дозі 1,5 мкг / кг десятикратно, внутрибрюшинно експериментальним тваринам (щури, миші) істотно знижує підвищену імунологічну реактивність, перешкоджаючи тим самим її гіперактивації і розвитку аутоімунних ускладнень, а й нормалізує ряд біохімічних показників сироватки крові, що свідчить про коригуючий ефект пептиду на функціональну активність гепатоцитів. Тим самим, трипептид Gly-His-Lys при такому способі введення володіє одночасним коригуючі ефектом як щодо функціональної активності гепатоцитів, так і щодо імунологічної реактивності.

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

Спосіб корекції біохімічних і імунологічних порушень в умовах експериментальної гострої токсичної гепатопатии, що супроводжується підвищенням імунологічної реактивності, що відрізняється тим, що парентеральний один раз на добу протягом десяти днів поспіль вводять супрессірует імунну відповідь трипептид H ₂ N-Gly-L-His-L-Lys -COOH в дозі 1,5 мкг / кг маси.

Версія для друку
Дата публікації 02.04.2007гг

НОВІ СТАТТІ ТА ПУБЛІКАЦІЇ
	Технологія виготовлення універсальних муфт для бесварочного, безрезьбовиє, бесфлянцевого з'єднання відрізків труб в трубопроводах високого тиску (мається відео)
	Технологія очищення нафти і нафтопродуктів
	Про можливість переміщення замкнутої механічної системи за рахунок внутрішніх сил
	Світіння рідини в тонких діелектричних каналох
	Взаємозв'язок між квантової і класичної механікою
	Міліметрові хвилі в медицині. Новий погляд. ММВ терапія
	магнітний двигун
	Джерело тепла на базі нососних агрегатів