| початок розділу
Виробничі, аматорські радіоаматорські Авіамодельний, ракетомодельного Корисні, цікаві |
хитрощі майстру
електроніка фізика технології винаходи |
таємниці космосу
таємниці Землі таємниці Океану хитрощі Карта розділу |
  |
| Використання матеріалів сайту дозволяється за умови посилання (для сайтів - гіперпосилання) | |||
Навігація: => |
На головну / Каталог патентів / В розділ каталогу / Назад / |
|
ВИНАХІД
Патент Російської Федерації RU2043767
СПОСІБ ПРИДУШЕННЯ ВІЛ-інфекції
Ім'я винахідника: Асафів А.В .; Безюлев В.В .; Аносова І.Г.
Ім'я патентовласника: Науково-виробниче підприємство "Фармек"
Адреса для листування:
Дата початку дії патенту: 1993.05.24
Винахід відноситься до медицини і може бути використано для придушення ВІЛ-інфекції, що викликає СНІД у людини. Суть винаходу полягає в тому, що для придушення ВІЛ-інфекції використовують комплекси екзогенної ДНК з полівалентними металами. Спосіб має високу противірусну активність при низькій токсичності.
ОПИС ВИНАХОДИ
Винахід відноситься до медицини, а саме до вірусології, і може, бути використано для придушення ВІЛ-інфекції, що викликає СНІД у людини.
Зростання захворюваності та зростаюча смертність від СНІДу при неможливості ефективного лікування робить актуальним пошук нових препаратів для боротьби з ВІЛ-інфекцією.
Відомі способи придушення ВІЛ-інфекції, що включають введення нуклеотидних аналогів, зокрема 3-ази-3-дезокситимидина-АЗТ. Однак цей препарат ефективний лише на ранніх стадіях розвитку захворювання і навіть в терапевтичних дозах мають високу токсичність, що дає в клінічній практиці ускладнення (головний біль, анемія, порушення з боку шлунково-кишкового тракту), що обмежують його використання. Відомі способи, що включають введення діфторірованних нуклеозидов, ліпосомних нуклеозидних аналогів, проте ефективність їх невелика.
Мета винаходу розробити ефективність спосіб пригнічення ВІЛ-інфекції, що поєднує високу ефективність з низькою токсичністю.
Пропонований спосіб полягає в тому, що використовують комплекс натрієвої солі дезоксирибонуклеїнової кислоти (ДНК) з полівалентними металами (цинком, нікелем, кобальтом, залізом) при співвідношення від 1: 1 до 1: 1000, а введення препарату здійснюють підшкірно, внутрішньоочеревинно, інтраназально або в спинномозковий канал в залежності від форми захворювання в терапевтично еквівалентних дозах.
Суттєвими ознаками винаходу слід вважати використання в рамках способу комплексу натрієвої солі ДНК з полівалентними металами, раніше за даними показаннями не використовувати, їх співвідношення, а й дози і режими введення препаратів. Вперше показана можливість отримання противірусного ефекту при різних способах введення препарату, що дуже важливо при різних клінічних формах СНІДу легеневої, шлунково-кишкової, з ураженням ЦНС.
Комплекс натрієва сіль ДНК метал складається із з'єднань натрієвої солі ДНК низкомолекулярной, нізкополімерной, містить не менше 80% нативної натрієвої солі ДНК, отриманої з молочка осетра, і має наступні характеристики: Мол. м 270-500 · 10 3 Дальтон Гіперхромних ефект: 37% не більше 1% білка за вагою, не більше 17% вологи за вагою Молярні співвідношення нуклеотидів аденін 29,0 тимін 27,0 гуанін 22,0 цитозин 20,0 і поливалентного металу , а саме цинку (Zn), кобальту (Со), нікелю (Ni), заліза (Fe).
Для придушення ВІЛ в системах in vitro використовували комплекси ДНК-Nа з цинком, кобальтом, нікелем і залізом при різних концентраціях компонентів. Для порівняння використовували АЗТ виробництва компанії "Wellcome". Антивірусну активність препаратів оцінювали з використанням методів, рекомендованих для цієї мети ВООЗ. Були використані культури перевіваемих клітинних ліній СЕМ-SS і МТ-4. Клітини культивували при концентрації (0,03-0,05) х 10 5 клітин на 1 мл середовища РРМI 1640 з 10% фетальної сироватки телят, 300 мг / мл L-глутаміну, 100 мкг / мл гентаміцину і вирощували в формі суспензії. Життєздатність клітин перевіряли шляхом фарбування їх 0,4% -ного розчину трепанового синього. Як джерела вірусів використовували штами HIV / IVS і HIV-1 HTLV / IIIB.
Суспензію клітин поміщали в 24-ямкові панелі, обробляли різними дозами препарату і заражали ВІЛ. Множинність інфекції становила 0,01 ДТЗ 50 на клітку. Після цього культури інкубували при 37 о С в атмосфері, що містить 5% СО 2 при вологості 98% протягом 5-7 днів до моменту визначення цитопатического впливу вірусу на культуру клітин.
Для оцінки формування вірусного антигену використовували імуноферментний аналіз.
Результати представлені в табл.1.
З наведеної таблиці видно, що при введенні в культуральне середовище комплексу ДНК-метал відзначається придушення ВІЛ-інфекції in vitro. Причому оптимальне співвідношення ДНК-метал знаходиться в межах 1: 1-1 1000. При цьому вірусостатіческім ефект поєднується з низькою цитотоксичність. При введенні в культивованих середу препарату АЗТ відзначається висока цитотоксичність при помірному противірусної дії.
Надалі токсичність препаратів при використанні запропонованого способу була досліджена на експериментальних тварин в системі in vivo.
Тести проводилися паралельно за всіма 4 кодованим препаратів в порівнянні з азидотимидином в дозах 5, 10, 20, 35, і 50 мг / кг. Дослідження токсичності чотирьох препаратів і азидотимидина проводилися на нелінійних білих мишах вагою 6-7 г з використанням різних концентрацій препаратів на кілограм ваги тварин в обсязі 0,2 мл в формі підшкірних, інтраназальних і внутрішньочеревно ін'єкцій і в обсязі 0,03 мл в формі інтрацеребральних ін'єкцій . Тварин тримали під наглядом протягом 2 тижнів, потім розраховували LD 50 по методу Curber. За дозу LD 50 брали летальну дозу препарату, що викликала смерть 50% тварин.
Результати дослідження токсичності цих препаратів наведені в табл.2.
З таблиць видно, що всі п'ять препаратів незалежно від дози виявилися нетоксичними для білих мишей вагою 5-7 г при підшкірному, интраназальном, интраабдоминальной введенні (термін спостереження 2 тижні). У той же час, зареєстрована 50% -ва смертність серед мишей при перевищенні дози ДНК-Na-Fe 50 мг / кг при інтрацеребральному введенні. Азидотимидин і викликав смерть 50% мишей при інтрацеребральному введенні в дозах від 10 до 50 мг / кг ваги тварин. Характерно, що у досліджуваних комплексів, практично при будь-якому способі введення зберігається противірусна активність, в той же час, як у AZT вона краще виражена при внутрішньоцеребральному, підшкірному та введенні.
Запропоновані комплекси ДНК-Na-метал мають виражену антиВІЛ-активністю; їх противірусна активність поєднується з низькою токсичністю практично при будь-якому способі введення в дозі 10-50 мг / кг, противірусна активність проявляється практично при будь-якому способі введення.
П р и м і р 1. У експерименті використовували культуру перещеплюваних клітин лінії CEM-SS і МТ-4. Клітини культивували при концентрації 0,03 0,05 · 10 6 клітин на 1 мл середовища РРМI 1640 з 10% фетальної сироватки телят, 300 мкг / мл L-глутаміну, 100 мкг / мл гентаміцину і вирощували в формі суспензії. Життєздатність клітин перевіряли шляхом фарбування 0,4% -ним розчином трепанового синього. Як джерела вірусів використовували штами HIV / IVS і HIV-1 HT2V / IIIB. Суспензію клітин поміщали в 24-ямкові панелі, обробляли різними дозами комплексу ДНК-Na-Zn при співвідношенні ДНК і металу (М / M) 1: 1; 4: 9; 3:10; 0,5: 350; 1: 1000; 1: 1100 і заражали ВІЛ. Множинність інфекції становила 0,01 ТСD 50 на клітку. Після цього культури інкубували при 37 о С в атмосфері, що містить 5% СО 2 при вологості 98% протягом 5-7 днів до моменту визначення цитопатического впливу вірусу на культуру клітин. Для оцінки формування вірусного антигену використовували імуноферментний аналіз.
В експерименті було показано, що кількість сінцітіев у відсотках від контролю за вірусу при співвідношенні ДНК-метал 3:10 склало 25% при 69% життєздатних клітин; при співвідношенні 0,5: 350 35% при 81,2% життєздатних клітин; при співвідношенні 1: 1000 70% і 84,3% життєздатних клітин, при співвідношенні 1 1100 100% і 86,2% життєздатних клітин.
П р и м і р 2. Постановка експерименту, як в прикладі 1.
Суспензію клітин обробляли різними дозами комплексу ДНК-Na-нікель при тих же співвідношеннях компонентів, що і в прикладі 1. В експерименті показано, що кількість сінцітіев у відсотках від контролю за вірусу при співвідношенні ДНК: нікель 3:10 0,5: 350 дорівнювало нулю при життєздатності клітин 71 і 79% при співвідношенні 1: 1000 68% при 84,3% життєздатних клітин і при співвідношенні 1 1100 100% при 87,5% життєздатних клітин.
П р и м і р 3. Постановка експерименту, як в прикладі 1.
Суспензію клітин обробляли різними дозами комплексу ДНК-Na-кобальт при тих же співвідношеннях компонентів, що в прикладі 1. В експерименті показано, що кількість сінцітіев у відсотках від контролю за вірусу при співвідношенні ДНК-Na-кобальт 3:10 відповідає 10% при життєздатності клітин 78,4% при співвідношенні 0,5: 350 15% при життєздатності клітин 87,1, при співвідношенні 1: 1000 66% при життєздатності 76,3% і при співвідношенні 1 1100 життєздатність відповідно склала 82,1%
П р и м і р 4. Постановка експерименту, як в прикладі 1.
Суспензію клітин обробляли різними дозами комплексу ДНК-Na-залізо, при тих же співвідношеннях компонентів, що в прикладі 1. В експерименті показано, що кількість сінцітіев у відсотках від контролю за вірусу при співвідношенні ДНК-Fe 3:10, 0,5: 350 відповідає 0 при життєздатності клітин відповідно 79,3 і 82,1% при співвідношенні ДНК-Fе 1: 1000 кількість сінцітіев 61% при життєздатності клітин 81,7, при співвідношенні 1 1100 100% при життєздатності 84,5%
Таким чином, представлені приклади ілюструють високу анти-ВІЛ активність запропонованого способу при низькій токсичності.
Такий спосіб в порівнянні з відомим володіє наступними перевагами: висока анти-ВІЛ активність в поєднанні з низькою токсичністю, ефективність в низьких дозах при будь-якому способі введення, що дозволяє вибрати адекватний шлях введення препарату при різних клінічних формах СНІДу. Спосіб може бути рекомендований для клінічного вивчення.
ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
СПОСІБ ПРИДУШЕННЯ ВІЛ-інфекції, що включає введення препарату нуклеїнових кислот, що відрізняється тим, що використовують препарат, отриманий з молочка осетра, що містить не менше 80% нативної натрієвої солі ДНК мол.м. 270 500 · 10 3 Д при молярних співвідношеннях нуклеотидів аденін 29,0, тимін 27,0, гуанін 22,0, цитозин 20,0, в комбінації з нетоксичним полівалентним металом в молярних співвідношеннях 1 + 1 1 1000, який вводять підшкірно, внутрішньоочеревинно або в спинномозковий канал в залежності від клінічної форми захворювання, підбираючи терапевтичні адекватні дози.
Версія для друку
Дата публікації 06.01.2007гг
Коментарі
Коментуючи, пам'ятайте про те, що зміст і тон Вашого повідомлення можуть зачіпати почуття реальних людей, проявляйте повагу та толерантність до своїх співрозмовників навіть у тому випадку, якщо Ви не поділяєте їхню думку, Ваша поведінка за умов свободи висловлювань та анонімності, наданих інтернетом, змінює не тільки віртуальний, але й реальний світ. Всі коменти приховані з індексу, спам контролюється.