| початок розділу
Виробничі, аматорські радіоаматорські Авіамодельний, ракетомодельного Корисні, цікаві |
хитрощі майстру
електроніка фізика технології винаходи |
таємниці космосу
таємниці Землі таємниці Океану хитрощі Карта розділу |
  |
| Використання матеріалів сайту дозволяється за умови посилання (для сайтів - гіперпосилання) | |||
Навігація: => |
На головну / Каталог патентів / В розділ каталогу / Назад / |
|
ВИНАХІД
Патент Російської Федерації RU2202796
СПОСІБ ВИЗНАЧЕННЯ СПОСОБНОСТИ ЕРИТРОЦИТІВ ЛЮДИНИ
сорбированная ПРЕДНІЗОЛОН
Ім'я винахідника: Кирдей Є.Г .; Дмитрієва Л.А .; Белохвостикова Т.С.
Ім'я патентовласника: Державна установа Інститут травматології та ортопедії НЦРВХ ВСНЦ СО РАМН
Адреса для листування: 664003, м Іркутськ, вул. Борців революції, 1, Інститут травматології та ортопедії НЦРВХ ВСНЦ СО РАМН, патентна група, Р.Н.Харламовой
Дата початку дії патенту: 2000.01.10
Винахід відноситься до галузі медицини, зокрема до імунології. Спосіб забезпечує підвищення ефективності лікування за рахунок визначення індивідуальної сорбційної активності еритроцитів пацієнта до преднизолону до застосування в комплексі лікувальних заходів іммунофармакотерапіі. Проводять постановку реакції клітинної іммуносорбціі і отримання надосадової рідини, при цьому виділену еритромасу инкубируют з розчином преднізолону в концентрації 1 мкг / мл в рівних обсягах протягом 60 хв, центрифугують і отримують надосадову рідину, потім в першу пробу вносять 0,05 мл середовища 199, в другу - 0,05 мл розчину преднізолону в вихідної концентрації і в третю - 0,05 мл надосадової рідини, отриманої після інкубації преднізолону з еритромаси, потім в усі проби додають 0,05 мл розчину нітросинім тетразолия і 0,1 мл цільної крові пацієнта , після чого інкубують, центрифугують, видаляють надосадову рідину, з клітинного осаду готують мазки, фіксують метанолом і забарвлюють нейтральним червоним, підраховують процентний вміст нейтрофілів, в цитоплазмі яких містяться гранули діформазана, потім оцінюють біологічну активність преднізолону в першій дослідній пробі по відсотку зниження НТС- активності нейтрофілів в порівнянні з контрольною пробою без преднізолону і визначають сорбційну активність еритроцитів за різницею показників в пробі з надосадової рідиною і в пробі з розчином преднізолону.
ОПИС ВИНАХОДИ
Пропонований винахід відноситься до галузі медицини, в саме до імунології, і може застосовуватися в іммунофармакотерапіі з використанням аутоерітроцітов, навантажених, наприклад, преднізолоном в комплексі лікувальних заходів при різних хронічних запальних захворюваннях, що супроводжуються ознаками гіперактивації імунної системи.
Найбільш близьким до пропонованого є спосіб визначення сорбційної активності рецепторного апарату еритроцитів людини. Сутність відомого способу полягає в наступному: кров хворого беруть в кількості 4-5 мл в пробірку, що містить 0,1 мл 2,5 тис. ОД гепарину, еритроцити відмивають триразовим центрифугуванням 5-7 хвилин при 1500 об / хв в фосфатно-сольовому буфері . Відмиті еритроцити розводять фосфатно-сольовим буфером до отримання 3-5% суспензії і 1,5 мл отриманої суспензії інкубують при кімнатній температурі протягом 40-45 хвилин з 1,5 мл розведеної мишачої сироватки. Після закінчення інкубації суміш центрифугують і вимірюють оптичну щільність надосадової рідини проти контрольної проби на спектрофотометрі. Контрольна проба являє собою 1,5 мл мишачої сироватки взятого розведення, до яких додають 1,5 мл фосфатно-сольового буфера і обробляють і, як досвідчену пробу. Отримане значення порівнюють із середнім донорським контролем і різниця відображає сорбционную активність рецепторного апарату еритроцитів людини (1).
Однак відомий спосіб володіє певними недоліками, а саме:
- відомий спосіб визначення сорбційної активності дозволяє судити про функціональний стан рецепторного апарату еритроцитів людини і прогнозі щодо одужання, в той час, як пропонований спосіб може бути застосований для оцінки сорбційної активності еритроцитів щодо конкретного препарату і можливості проведення в комплексі лікувальних заходів іммунофармакотерапіі з використанням аутоерітроцітов , навантажених преднізолоном при різних захворюваннях, що супроводжуються гіперактивацією імунної системи.
Виходячи з відомого рівня технологій визначення сорбційної активності еритроцитів була поставлена задача: підвищити ефективність лікування за рахунок визначення індивідуальної сорбційної здатності еритроцитів пацієнта до преднизолону до застосування в комплексі лікувальних заходів іммунофармакотерапіі.
Поставлена задача вирішена наступним чином.
Визначення здатності еритроцитів людини сорбировать преднізолон виконують шляхом постановки реакції клітинної іммуносорбціі і отримання надосадової рідини. Новим в пропонованому способі є те, що виділену еритромасу инкубируют з розчином преднізолону в концентрації 1 мкг / мл в рівних обсягах протягом 60 хвилин, центрифугують і отримують надосадову рідину. Потім в першу пробу вносять 0,05 мл середовища 199, в другу пробу 0,05 мл розчину преднізолону в вихідної концентрації і в третю пробу 0,05 мл надосадової рідини, отриманої після інкубації преднізолону з еритромаси. Потім в усі проби додають 0,05 мл розчину нітросинім тетразолия і 0,1 мл цільної крові пацієнта. Після чого інкубують, центрифугують і видаляють надосадову рідину. З клітинного осаду готують мазки, фіксують метанолом і забарвлюють нейтральним червоним, підраховують процентний вміст нейтрофілів, в цитоплазмі яких містяться гранули діформазана. Потім оцінюють біологічну активність преднізолону в першій дослідній пробі по відсотку зниження НСТ-активності нейтрофілів в порівнянні з контрольною пробою без преднізолону і визначають сорбційну активність еритроцитів за різницею показників в пробі з розчином преднізолону в вихідної концентрації і в пробі з надосадової рідиною і при виявленні різниці між цими показниками більш 5% вважають за доцільне проведення екстракорпоральної іммунофармакотерапіі з використанням аутоерітроцітов, оброблених розчином преднізолону.
Пояснюємо істотність відмінних ознак пропонованого способу іммунофармакотерапіі.
При інкубації еритромаси з розчином преднізолону еритроцити мають здатність неспецифически сорбировать і концентрувати на своїй поверхні преднізолон і при введенні в організм надавати регуляторний вплив на процеси лімфопроліфераціі, що лежать в основі імунної відповіді.
Отриману після інкубації і центрифугування еритромаси з розчином преднізолону в вихідної концентрації надосадову рідину використовують для постановки НСТ-тесту для оцінки сорбційної здатності еритроцитів, яка визначається за ступенем падіння біологічної активності преднізолону після його інкубації з еритроцитами.
Першу пробу з додаванням 0,05 мл середовища 199 використовують як контрольну для подальшого порівняння з досвідченими пробами.
Другу пробу з додаванням 0,05 мл розчину преднізолону в концентрації 1 мкг / мл використовують для оцінки біологічної активності преднізолону в порівнянні з контрольною пробою.
Третю пробу з додаванням 0,05 мл надосадової рідини, отриманої після інкубації преднізолону в вихідної концентрації з еритромаси, використовують для оцінки сорбційної здатності еритроцитів за ступенем падіння біологічної активності препарату в порівнянні з другою пробою.
Додавання в усі проби 0,05 мл розчинної барвника нітросинім тетразолия і 0,1 мл цільної крові пацієнта з наступною інкубацією в термостаті при температурі 37 o С і центрифугування необхідно для приготування мазків і визначення процентного вмісту нейтрофілів, в цитоплазмі яких містяться гранули нерастворимого діформазана.
Біологічну активність преднізолону оцінюють по відсотку зниження НСТ-активності нейтрофілів в пробі з додаванням розчину преднізолону в вихідної концентрації в порівнянні з контрольною пробою без преднізолону.
Наявність і величину сорбційної активності еритроцитів обчислюють за різницею показників проби з надосадової рідиною і проби з розчином преднізолону в початковій концентрації.
5 процентна різниця виключає сшибку при підрахунку НСТ-позитивних клітин та призів будуть достовірних результатів при вирішенні питання про доцільність проведення у конкретного пацієнта екстракорпоральної іммунофармакотерапіі з використанням аутоерітроцітов, оброблених преднізолоном в комплексі лікувальних заходів.
Проведені патентні дослідження по підкласу G 01 N 33/53, A 61 До 37/02 і аналіз науково-медичної інформації, що відбиває існуючий рівень способів визначення сорбційної здатності еритроцитів периферичної крові, не виявили технологій, ідентичних запропонованої. Таким чином, пропонований спосіб визначення еритроцитів людини сорбировать преднізолон є новим.
Взаємозв'язок і взаємодія істотних прийомів запропонованого способу визначення здатності еритроцитів людини сорбіроват' преднізолон забезпечує досягнення нового клінічного ефекту у вирішенні поставленого завдання, а саме: підвищити ефективність лікування за рахунок визначення індивідуальної сорбційної здатності еритроцитів пацієнта до преднизолону.
Пропонований спосіб може бути широко застосований в практичній охороні здоров'я, так як може бути відтворений неодноразово і не вимагає використання дорогого устаткування і реактивів.
Сутність запропонованого способу визначення здатності еритроцитів людини сорбировать преднізолон полягає в наступному.
Роблять забір крові пацієнта з ліктьової вени в стерильних умовах на гепарині з розрахунку 25 ОД на 1 мл крові, частина якої використовують для отримання еритромаси шляхом триразової відмивання в фізіологічному розчині хлориду натрію. Рівні обсяги відмитої еритромаси і розчину преднізолону в концентрації 1 мкг / мл инкубируют в термостаті при 37 o C протягом 1 години. Після інкубації суспензію центрифугують при 1000 об / хв протягом 10 хвилин, знімають надосадову рідину, яку використовують в подальших дослідженнях. Постановку НСТ-тесту проводять в планшетах для імунологічних досліджень. В першу пробу вносять 0,05 мл середовища 199, в другу - 0,05 мл розчину преднізолону в концентрації 1 мкг / мл, в третю - 0,05 мл надосадової рідини, подученний після ерітросорбціі. У всі проби вносять розчин нітросинім тетразолия в обсязі 0,05 мл і 0,01 мл цільної крові пацієнта. Проби інкубують в термостаті при 37 o C і протягом 30 хвилин, центрифугують 10 хвилин при 1000 об / хв. З клітинного осаду готують мазки, фіксують метанолом, фарбують нейтральним червоним і визначають процентний вміст нейтрофілів, що містять в цитоплазмі гранули діформазана (НСТ-позитивних клітин).
Біологічну активність преднізолону в пробі з його вихідної концентрацією і в пробі з надосадової рідиною, отриманої після інкубації розчину преднізалона з еритромаси, обчислюють у відсотках зниження НСТ-активності нейтрофілів в порівнянні з показником контрольної проби без преднізолону. Сорбційну активність еритроцитів людини до преднизолону обчислюють за різницею показників в пробі з надосадової рідиною і в пробі з розчином преднізолону і при виявленні різниці між цими показниками більше 5 відсотків вважають за доцільне проведення екстракорпоральної іммунофармакотерапіі з використанням аутоерітроцітов, оброблених розчином преднізолону.
Сутність запропонованого способу пояснюється клінічними прикладами.
Приклад 1. Хворий У., 52 роки. Діагноз: незрощений діафізарний перелом правої великогомілкової кістки, хронічний остеомієліт, ІДС гіпосупрессорного типу з ознаками гіперактивації фагоцитів.
Сорбційну активність еритроцитів (САЕ) оцінювали за здатністю преднізолону в концентрації 1 мкг / мл пригнічувати активність нейтрофілів перед і після інкубації його з еритроцитами, інкубацію здійснювали в термостаті при температурі 37 o C протягом 1 години після змішування рівних об'ємів еритромаси з розчином преднізолону. САЕ обчислювали у відсотках падіння біологічної активності преднізолону після інкубації його з еритроцитами.
У контрольній пробі без преднізолону відсоток НСТ-активності склав 62%. У 1-й дослідній пробі (з додаванням розчину преднізолону в вихідної концентрації) НСТ-активність нейтрофілів склала 46%. У другій дослідній пробі (з додаванням надосадової рідини після інкубації еритроцитів з преднізолоном) НСТ-активність нейтрофілів - 57%. Показник САЕ склав 11% (57% - 46% = 11%).
При визначенні здатності еритроцитів хворого сорбировать преднізолон показник НСТ-активності нітрофілов в пробі з надосадової рідиною, отриманої після інкубації еритромаси пацієнта з розчином преднізолону в вихідному концентрації перевищив показник НСТ-активності в пробі з додаванням преднізолону. Таким чином, даному хворому доцільно проведення екстракорпоральної іммунофармакотерапіі з використанням аутоерітроцітов, оброблених розчином преднізолону в комплексі лікувальних заходів з метою зниження гіперактивації імунної системи.
Приклад 2. Хвора Д., 19 років. Діагноз: первинно-відкритий інфікований подвійний перелом середньої третини правої великогомілкової кістки зі зміщенням, некроз м'яких тканин в середній третині правої гомілки, інфікована рана правої стопи, ПДВ гіперсупрессорного типу вираженого характеру з ознаками гіперактивації фагоцитирующих лейкоцитів.
У контрольній пробі (без преднізолону) відсоток НСТ-активності нейтрофілів склав 77%. У 1-й дослідній пробі (з додаванням розчину преднізолону в вихідної концентрації) НСТ-активність склала 58%. У 2-й дослідній пробі (з додаванням надосадової рідини після інкубації еритромаси з розчином преднізолону) HСT-активність нейтрофілів - 54%. Показник САЕ склав 5% (58 - 54% = 4%).
Отже, при визначенні здатності еритроцитів даної хворої сорбировать преднізолон показник НСТ-активності нейтрофілів в пробі з надосадової рідиною, отриманої після інкубації еритромаси з розчином преднізолону перевищує показник НСТ-активності в пробі з розчином преднізолону в вихідної концентрації не більше ніж на 5%. Проведення екстракорпоральної іммунофармакотерапіі з використанням аутоерітроцітов, оброблених преднізолоном недоцільно, зважаючи на низьку сорбційної активності еритроцитів.
Таким чином, пропонований "Спосіб визначення здатності еритроцитів людини сорбировать преднізолон" дозволяє в порівнянні з відомими технологіями підвищити ефективність лікування за рахунок визначення індивідуальної сорбційної здатності еритроцитів пацієнта до преднизолону до застосування в комплексі лікувальних заходів іммунофармакотерапіі.
ДЖЕРЕЛО ІНФОРМАЦІЇ
1. А.С. СРСР N1778707, БІ 44, G 01 N 33/531.
ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
Спосіб визначення здатності еритроцитів людини сорбировать преднізолон шляхом постановки реакції клітинної іммуносорбціі і отримання надосадової рідини, що відрізняється тим, що виділену еритромасу инкубируют з розчином преднізолону в концентрації 1 мкг / мл в рівних обсягах протягом 60 хв, центрифугують і отримують надосадову рідину, потім в першу пробу вносять 0,05 мл середовища 199, в другу - 0,05 мл розчину преднізолону в вихідної концентрації і в третю 0,05 мл надосадової рідини, отриманої після інкубації преднізолону з еритромаси, потім в усі проби додають 0,05 мл розчину нітросинім тетразолия і 0,1 мл цільної крові пацієнта, після чого інкубують, центрифугують, видаляють надосадову рідину, з клітинного осаду готують мазки, фіксують метанолом і забарвлюють нейтральним червоним, підраховують процентний вміст нейтрофілів, в цитоплазмі яких містяться гранули діформазана, потім оцінюють біологічну активність преднізолону в першій дослідній пробі по відсотку зниження НСТ-активності нейтрофілів в порівнянні з контрольною пробою без преднізолону і визначають сорбційну активність еритроцитів за різницею показників в пробі з надосадової рідиною і в пробі з розчином преднізолону.
Версія для друку
Дата публікації 02.04.2007гг
Коментарі
Коментуючи, пам'ятайте про те, що зміст і тон Вашого повідомлення можуть зачіпати почуття реальних людей, проявляйте повагу та толерантність до своїх співрозмовників навіть у тому випадку, якщо Ви не поділяєте їхню думку, Ваша поведінка за умов свободи висловлювань та анонімності, наданих інтернетом, змінює не тільки віртуальний, але й реальний світ. Всі коменти приховані з індексу, спам контролюється.