| початок розділу
Виробничі, аматорські радіоаматорські Авіамодельний, ракетомодельного Корисні, цікаві |
хитрощі майстру
електроніка фізика технології винаходи |
таємниці космосу
таємниці Землі таємниці Океану хитрощі Карта розділу |
  |
| Використання матеріалів сайту дозволяється за умови посилання (для сайтів - гіперпосилання) | |||
Навігація: => |
На головну / Каталог патентів / В розділ каталогу / Назад / |
|
ВИНАХІД
Патент Російської Федерації RU2289813
СПОСІБ ВИЯВЛЕННЯ ФОРМ трихомонади
Ім'я винахідника: Гарасько Катерина Володимирівна (RU); Морєва Жанна Германівна (RU)
Ім'я патентовласника: Державна освітня установа вищої професійної освіти "Іванівська державна медична академія Міністерства охорони здоров'я Російської Федерації" (RU)
Адреса для листування: 153012, г.Іваново, пр. Ф. Енгельса, 8, ГОУ ВПО "Івановська державна медична академія Міністерства охорони здоров'я Російської Федерації"
Дата початку дії патенту: 2004.11.09
Винахід відноситься до медицини, а саме до медичної мікробіології. Для виявлення форм трихомонад виробляють посів крові в живильне середовище Тераса з додаванням інактивованої протягом 5-10 хвилин при температурі + 56 ° С сироватки крові людини або коня і антибіотиків в кількості 500 Од / мл. Культуру інкубують 2 діб при температурі + 37 ° С. Роблять пересівши на аналогічну середу, але містить сироватку крові людини або коня, інактивовану протягом 15-20 хвилин, і антибіотики в кількості 250 Од / мл. Повторно інкубують протягом 2 діб при температурі + 37 ° С. Роблять пересівши на середу, що містить сироватку, інактивовану 30 хвилин, без додавання антибіотиків, і інкубують проби при температурі + 37 ° С протягом 2 діб. Здійснюють ще 1-2 пересіву на середу, з повністю інактивованої сироваткою крові людини або коня і без додавання антибіотиків. За цих подій активному брунькування або шізогоніі судять про наявність живих атипових форм трихомонад, а при відсутності розмноження про дегенеративних, руйнуються формах. Використання способу дозволяє виявити атипові форми трихомонад.
ОПИС ВИНАХОДИ
Винахід відноситься до медицини, а саме до акушерству та гінекології, паразитології, гематології, урології, венерології, медичної мікробіології.
За даними літератури відомі способи виявлення трихомонад з клінічного матеріалу. Найбільш надійним є культуральний спосіб, який служить для виявлення типових форм трихомонад в досліджуваному матеріалі на поживних середовищах. Найбільші ростові якості проявляються на середовищах складного складу, наприклад, Тераса або Джонсона-Трасселя, що містять в якості основних компонентів печінковий бульйон, розчин Рінгера, пептони, мальтозу, агар-агар, L-цистеїн з додаванням в якості збагачує фактора сироватку крові людини або коня , інактивовану протягом 30 хвилин при температурі + 56 ° С. З метою придушення супутньої мікрофлори в середу додають антибіотики пеніцилін, стрептоміцин і ністатин в кількості 1500-2000 Од / мл, попередньо розчинених в розчині Рінгера. Встановлюють рН середовища до 6,0-6,3.
Сутність відомих способів в тому, що після забору патологічного матеріалу зі слизових оболонок сечостатевих органів, проводять його посів способом інокуляції в рідку, живильне середовище, з подальшим инкубированием при температурі + 37 ° С протягом 5-7 діб (Б.В.Кліменко, Е.Р.Авазов і ін. Трихомоніаз чоловіків, жінок і дітей. Санкт-Петербург, ТОВ "Сюжет", 2001, с.131-138). Однак відомо проживання трихомонад не тільки на слизових оболонках сечостатевих органів, але і в периферичної крові, де трихомонади, перебуваючи в невластивої їм середовища проживання, представлені значною кількістю атипових форм, а методика, що дозволяє культурально виявляти атипові форми трихомонад в крові, в даний час не розроблена (П.П.Семенов, В.П.Семенов Тріхомонадниє поразки сечостатевих органів людини. Л. отд-е, "Медицина", 1972, с.23-25).
Недоліком даних способів є те, що вони не дозволяють виявляти атипові форми трихомонад, зокрема при посіві крові, які, виявляючи низьку метаболічну активність, насилу розмножуються на живильних середовищах.
Технічний результат пропонованого способу полягає у виявленні атипових форм трихомонад за рахунок додавання в живильне середовище сироватки крові людини або коня і збільшення часу проведеної інактивації сироватки з 5 до 30 хвилин в три етапи, що активує активність клітин найпростіших.
Даний результат досягається тим, що в живильне середовище додають стресовий фактор - біологічно активна речовина - сироватку крові людини або коня трохи інактивовану, що сприяє активному розмноженню шляхом брунькування або шізогоніі амебовідних, цістоподобних або різних неправильних, без ядерних і нерухомих форм трихомонад, що володіють низькою метаболічної активністю.
ЗАПРОПОНОВАНИЙ СПОСІБ ЗДІЙСНЮЮТЬ наступним чином
Кров, узяту з вени пацієнта, не менше 2,0 мл змішують з 15 Од / мл гепарину і розливають в центрифужні пробірки, в кількості не більше 1 мл в кожну. Проби центрифугують 20-30 хвилин при 3000 об / хв. Після надосадочную рідку частину - плазму зливають, а осад в кількості 0,5 мл піпеткою Пастера засівають в 4 мл живильного середовища. Перший пасаж атипових форм отримують на живильному середовищі Тераса з додаванням в якості стресового і збагачує фактора сироватки крові людини або коня, інактивовану протягом 5-10 хвилин при температурі + 56 ° С. З метою придушення супутньої мікрофлори в середу додають антибіотики в кількості 500 Од / мл пеніцилін, стрептоміцин і ністатин, що є додатковим стресовим чинником.
Культуру інкубують 2 діб при температурі + 37 ° С під шаром вазелінового масла для створення анаеробних умов. Далі роблять пересів на аналогічну середу, але містить менший стресовий фактор: частково інактивовану сироватку крові людини або коня (протягом 15-20 хвилин) і антибіотики в кількості 250 Од / мл. Проби інкубують при температурі + 37 ° С. Через 2 доби виробляють третій пасаж культури на середу, що не містить стресових факторів: антибіотиків і з повністю інактивованої сироваткою крові (час інактивації 30 хвилин при температурі + 56 ° С). Проби інкубують при температурі + 37 ° С протягом 2 діб. Далі здійснюють ще 1-2 пересіву культури на середу, і не містить стресових факторів. Таке тривале пасивування дає можливість виділення чистої культури трихомонад, що містить максимальну кількість різних типових і атипових форм у вигляді білуватої придонному суспензії.
Пропонований спосіб забезпечує культуральну діагностику атипових - округлих і амебовідних, а й різних змінених неправильної форми трихомонад: гантелевідной, бісквітовідних і інших, різних за розміром, навіть якщо вони присутні в клінічному матеріалі в одиничному кількості. Це відбувається під дією слабо інактивованої сироватки крові людини або коня, яка є стресовим фактором, що викликає активне розмноження трихомонад шляхом брунькування або шизогонії з метою самозбереження.
Даний спосіб має важливе значення при діагностиці генералізованої форми трихомоніазу, коли інфекція протікає асимптомно і латентно, а збудник має атипову форму з низькою метаболічною активністю, яку важко виявити при звичайних культуральних способи діагностики.
приклад 1
Хвора Кірічева Р.А., вік 64 роки.
Діагноз: cr colon. В анамнезі трихомонадний кольпіт. Для лікування призначалися протістоцідние препарати. Після першого пасажу при посіві крові виявлено трихомонад 36 × 10 5 клітин / мл. Після 5 пересівань в живильному середовищі кількість трихомонад зросла до 280 × 10 5 клітин / мл. Отже, у хворої виявлені живі типові та атипові форми трихомонад.
приклад 2
Хвора Безрученкова А.А., вік 67 років.
Діагноз: cr sigmae. В анамнезі трихомонадний кольпіт. Для лікування призначалися протістоцідние препарати. Після першого пасажу при посіві крові виявлено трихомонад 18 × 10 4 клітин / мл. Після 5 пересівань в живильному середовищі зростання не спостерігалося, а кількість трихомонад зменшувалася. Отже, у хворої виявлені дегенеративні, руйнуються форми трихомонад.
ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
Спосіб виявлення форм трихомонад, що включає посів біологічного матеріалу в живильне середовище, що містить інактивовану сироватку крові людини або коня і антибіотики, що відрізняється тим, що проводять посів крові в живильне середовище Тераса з додаванням сироватки крові людини або коня, інактивованої протягом 5-10 хв при температурі + 56 ° С, і антибіотиків в кількості 500 Од / мл - пеніцилін, стрептоміцин і ністатин; потім культуру інкубують 2 діб при температурі + 37 ° С, роблять пересів на аналогічну середу, але містить сироватку крові людини або коня, інактивовану протягом 15-20 хв, і антибіотики в кількості 250 Од / мл, здійснюють повторну інкубацію протягом 2 діб при температурі + 37 ° С; потім роблять пересів на середовище, що містить сироватку, інактивовану 30 хв, без додавання антибіотиків, і інкубують проби при температурі + 37 ° С протягом 2 діб, далі здійснюють ще 1-2 пересіву на середу, з повністю інактивованої сироваткою крові людини або коня і без додавання антибіотиків, і по тому, що відбувається активного брунькування або шізогоніі судять про наявність живих атипових форм трихомонад, а при відсутності розмноження - про дегенеративних, руйнуються формах.
Версія для друку
Дата публікації 06.01.2007гг
Коментарі
Коментуючи, пам'ятайте про те, що зміст і тон Вашого повідомлення можуть зачіпати почуття реальних людей, проявляйте повагу та толерантність до своїх співрозмовників навіть у тому випадку, якщо Ви не поділяєте їхню думку, Ваша поведінка за умов свободи висловлювань та анонімності, наданих інтернетом, змінює не тільки віртуальний, але й реальний світ. Всі коменти приховані з індексу, спам контролюється.