| початок розділу
Виробничі, аматорські радіоаматорські Авіамодельний, ракетомодельного Корисні, цікаві |
хитрощі майстру
електроніка фізика технології винаходи |
таємниці космосу
таємниці Землі таємниці Океану хитрощі Карта розділу |
  |
| Використання матеріалів сайту дозволяється за умови посилання (для сайтів - гіперпосилання) | |||
Навігація: => |
На головну / Каталог патентів / В розділ каталогу / Назад / |
|
ВИНАХІД
Патент Російської Федерації RU2127429
СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ гіперпластичних процесів ТА РАКУ ЕНДОМЕТРІЯ
Ім'я винахідника: Коган Еммануїл Маркович; Савельєва Галина Михайлівна; Умаханова Мадіна Мусаевна; Жукоцкая Олександр Васильович; Копилов Віктор Федорович
Ім'я патентовласника: Коган Еммануїл Маркович; Савельєва Галина Михайлівна; Умаханова Мадіна Мусаевна; Жукоцкая Олександр Васильович; Копилов Віктор Федорович
Адреса для листування: 119828, Москва, Г-435, ул.М.Піроговская, 1а НІІФХМ патентний відділ
Дата початку дії патенту: 1995.06.06
Винахід відноситься до медицини і може бути використаний для диференціальної діагностики гіперпластичних процесів і раку ендометрія. Спосіб заснований на кількісному морфоденсітометріческом дослідженні змін интерфазного хроматину ядер залізистих клітин ендометрія при гіперпластичних процесах і раку ендометрія. Спосіб діагностики гіперпластичних процесів і раку ендометрія шляхом цитологічного аналізу взятого у хворої біологічного матеріалу відрізняється тим, що в якості біологічного матеріалу беруть відбитки ендометрія, отримані при діагностичному вискоблюванні слизової матки, фіксують сумішшю Нікіфорова, проводять рібонуклеазную обробку, фарбують галлоціанін-хромовими галуном, укладають в канадський бальзам, мікроденсітометріруют інтерфазна хроматин залізистих клітин ендометрія і на підставі отриманих параметрів (Comp IOD 1, C Std OD2, IOD, PERIMETR) розраховують показник: DF = 0,00013 Comp IOD 1 + 3,98725 C Std OD2 + 0,00001 IOD + 0,01213 PERIMETR - 13,4409 і при позитивному значенні показника діагностували рак ендометрія, при негативному - доброякісні процеси ендометрія. Винахід дозволяє проводити діагностику з більшою специфічністю і чутливістю.
ОПИС ВИНАХОДИ
Пропонований спосіб відноситься до галузі медицини і може бути використаний для диференціальної діагностики гіперпластичних процесів і раку ендометрія.
До гіперпластичних процесів ендометрія згідно гістологічної класифікації ВООЗ 1980 року відносять фонові процеси гіперплазії (залозиста, залозисто-кістозна, залозистий поліп) і передракові стани - атипова залозиста гіперплазія і залозистий поліп з явищами проліферації і атипии; до раку ендометрія - аденокарциноми різного ступеня зрілості. Диференціальна діагностика фонових і передракових процесів від раку слизової матки має виключно важливе практичне значення, так як на основі її проводять вибір адекватного методу лікування (1,2). Так, для залозистого поліпа ендометрія цілком прийнятні методи видалення поліпа під контролем гистероскопа і подальшого гормонального лікування; при наявності залозистого поліпа з явищами проліферації і атипии вдаються в залежності від віку пацієнтки або до тривалої гормональної терапії, або до оперативного лікування. Встановлено, що в 72% випадків раку ендометрія передує залозиста або атипова гіперплазія, а інтервал між розвитком гіперплазії і раку ендометрія або поліпів і раку ендометрія становить відповідно 8, 4 і 4, 6 років. Складність діагностики гіперпластичних (ГПЕ) і ракових процесів (АЦ) ендометрія полягає в схожості клінічної картини, тобто основний симптом захворювання - маткової кровотечі. Існуючі клінічні методи діагностики (ультразвукове дослідження, радіометр, гістеросальпінгографія, вивчення гормонального статусу, визначення рецепторів стероїдних гормонів в тканини ендометрія, імунологічні методи, гістерокопія, вишкрібання слизової матки, зондування матки) не можуть повністю задовольнити клініцистів через недостатню інформативності, відсутності можливості відобразити нозологическую специфічність патологічного процесу, тривалі і трудомісткі у виконанні і майже все є інвазивними методами (2).
Основним діагностичним методом в розпізнаванні внутрішньоматкової патології в даний час є гістологічне дослідження зіскрібків слизової матки, отриманих при діагностичне вишкрібання (3). Однак при цьому неодмінною умовою є бокові біопсія і видалення всієї слизової матки. Залишення змінених ділянок ендометрію в подальшому може призводити до необгрунтованого діагнозу рецидиву захворювання. До того ж морфологічну будову пухлини не завжди повністю відповідає біологічному течією пухлинного процесу, не дозволяє оцінити структурні та функціональні зміни хроматину ядра, що є ключовою ланкою як у процесах онтогенезу і клітинної адаптації, так і на ранніх етапах патогенезу багатьох захворювань, в тому числі злоякісних пухлин (4). Найбільш поширеним у всьому світі скринінг-методом діагностики раку ендометрія є цитологічний метод дослідження, точність діагностики якого досягає 60 - 84% (2,5).
При цитологічному дослідженні (світлової мікроскопії) аналіз проводиться візуально і результатом є якісне опис морфології, що не дозволяє об'єктивізувати і кількісно оцінити отримані результати, інтерпретація цитологічних досліджень може бути утруднена через погану якість препаратів, а й чинників, які можуть викликати зміни в ендометрії , особливо запалення.
Електронно-мікроскопічне дослідження дозволяє отримати загальні уявлення про розподіл хроматину в ядрі клітини, але методика не дає можливості оцінити функціональний стан геному, досить трудомістка, особливо в підготовці матеріалу для дослідження (4).
Цитохімічні і иммунохимические дослідження ендометріального матеріалу, можуть бути використані в якості допоміжних тестів для формування груп ризику раку ендометрія, так як більшість з них з високою частотою виявляються як при раку, так і при гіперплазії ендометрія.
В даний час в онкоморфологів застосовуються цитогенетичні методи, що дозволяють зрозуміти сутність спадкових змін в клітинах при розвитку пухлини і її прогресії. Оскільки ядро є носієм спадкової інформації, а структурний стан хромосом в інтерфазних ядрах відповідає активності генів, то станом гетерохроматина можна судити про функціонування генома (6).
На основі скануючої цитоспектрофотометрії клітинних ядер з наступною математичною обробкою сканограмм за допомогою різних статистичних показників (7) виявлено об'єктивне збільшення гетерогенності структури хроматину інтерфазних ядер при атипові гіперплазії і раку ендометрія в порівнянні з такими при залізистої гіперплазії і незміненому ендометрії.
Морфометричне і світлооптичних дослідження ядер епітелію ендометрія при передпухлинних ураженнях і раку ендометрія в цитоморфологічної діагностиці уражень ендометрія були зроблені В.Н. Новіком і співавт. (1990). Вивчено мазки матеріалу, отримані з порожнини матки 57 жінок за допомогою шприца Брауна (аспірати). Цитологічні препарати, фіксовані 96-градусним спиртом і пофарбовані гематоксилін-еозином, знебарвлювали і переокрашівалі по Фельгену з використанням холодного гідролізу в 5 н. HCl. Досліджувалися морфометрические параметри ядер клітин епітелію ендометрія (площа, периметр, максимальний і мінімальний діаметр), а й середня оптична щільність, дисперсія і інтегральна оптична щільність. Біометричні дані підтверджували Цитоморфологічне діагностику і в 85,7% випадків сприяли поділу клітин нормального і гиперплазированного епітелію від клітин передраку і високодиференційовані раку (8).
Цей метод можна розглядати як прототип, оскільки він є найбільш інформативним для диференціальної діагностики гіперпластичних процесів і раку ендометрія. Однак, на відміну від пропонованого в даній заявці способу, в способі-прототипі в якості об'єкта були використані аспірати з порожнини матки, що передбачає отримання менш багатого і якісного клітинного матеріалу для дослідження, менш щадний спосіб забору, приготування і фіксації препаратів, що може надавати шкідливу вплив на структурні елементи ядра. Як свідчать отримані результати, в пропонованому способі (в порівнянні з прототипом) використаний барвник, який є більш чутливим і специфічним для виявлення структурних змін интерфазного хроматину ядра клітини.
Метою даного винаходу є розробка способу, більш чутливого і специфічного для диференціальної діагностики гіперпластичних процесів і раку ендометрія.
Спосіб здійснюється наступним чином:
Зішкріб ендометрію, отриманий при діагностичному вискоблюванні слизової матки, відмивають від еритроцитів розчином Хенкса і роблять відбитки на предметному склі. Потім відбиток фіксують сумішшю Нікіфорова (етанол і ефір у співвідношенні 1: 1) протягом 20 хвилин, висушують на повітрі. Проводять рібонуклеазную обробку, рибонуклеаза (Reanal, ВНР) розлучається в осмолярність розчині сахарози в концентрації 200 ME / 100 мл. Обробка триває 60 хвилин при температурі 37 o C, після чого відбиток промивають в 3-х змінах дистильованої води. Фарбування роблять у розчині галлоціанін-хромових квасцов (ДХК), приготованому за стандартною методикою (9) протягом 3-х годин при 37 o C. Препарат промивають 5 хв відстояною водопровідною водою. Процес фарбування займає в середньому 5 годин.
Після забарвлення препарат полягає в канадський бальзам і проводиться мікроденсітометріческое дослідження на системі аналізу зображень. Результатом мікроденситометри є оптичні, топологічні та геометричні характеристики интерфазного хроматину по компонентах (еухроматин і гетерохроматин) і ядра в цілому.
Процедура дослідження одного відбитка займає 30 - 40 хвилин.
Попередньо на навчальних вибірках для різних груп гіперпластичних процесів (74 хворих) і раку ендометрія (12 хворих) були встановлені найбільш інформативні загальноприйняті показники структури интерфазного хроматину:
CompIOD1 - інтегральна оптична щільність гетерохроматина;
CStdOD2 - середньо-квадратичне відхилення оптичної щільності гетерохроматина;
IOD - інтегральна оптична щільність хроматину ядра;
PERIMETR - периметр ядра.
Для комплексної оцінки цих показників розраховується параметр DF для кожної групи
DF = 0,00013 Ч CompIOD1 + 3,98725 Ч CStdOD2 + 0,00001 Ч IOD + 0,01213 Ч PERIMETR-13,4409.
Формула для розрахунку параметрів DF отримана, застосуванням лінійного дискримінантного аналізу (10) за допомогою стандартного пакета статистичних програм. При позитивному значенні показника DF діагностували рак ендометрія (АЦ), при негативному - гіперпластичні процеси ендoмeтpія (ГПЕ) - железистую гіперплазію ендометрія (ЖГЕ), поліпи ендометрію (ПЕ), атрофію ендометрія (АЕ).
Подібну зв'язок між чисельними значеннями встановили при обстеженні груп хворих пре- і постменопаузального періоду, що знаходяться на обстеженні та лікуванні в гінекологічному відділенні 31 ГКБ р Москви з підозрою на патологію ендометрія. В результаті проведеного аналізу виявили найбільш значущі показники структури интерфазного хроматину залізистих клітин ендометрія, розрахували похідний параметр DF для виявлення виду патології ендометрія.
Пропонований спосіб демонструють такі клінічні приклади:
Приклад 1.
Хвора М., 54 роки N історії хвороби - 940, 31 ГКБ.
Надійшла в клініку зі скаргами на кров'яні виділення в постменопаузі (ПМП) вперше, ПМП-5 років.
Клінічний діагноз: Залозисто-фіброзний поліп ендометрія. Під час обстеження і лікування в клініці пропонованим способом був досліджений хроматин інтерфазних ядер залізистих клітин ендометрія, отриманих при діагностичному вискоблюванні слизової матки. Досліджувана тканину ендометрію була відмита від еритроцитів в розчині Хенкса і зроблені відбитки на предметному склі. Отриманий відбиток висушували на повітрі, фіксували сумішшю Никифорова. Далі для усунення впливу рибонуклеїнової кислоти на результати сканування проводили рібонуклеазную обробку. Рибонуклеазу розводили в осмолярність розчині сахарози в концентрації 2000 Е на 100 мл розчину. Препарати обробляли в цьому розчині протягом 1 години при 37 o C, після цього їх промивали в 3-х змінах дистильованої води. Потім проводили фарбування препаратів в розчині ДХК. Розчин ДХК готувався за стандартною методикою (9). Фарбування проводили протягом 3 годин у термостаті при 37 o C, після чого препарати промивали 5 хв відстояною водопровідною водою.
Пофарбовані препарати укладали в канадський бальзам, після висушування досліджували на системі аналізу зображень.
Показники структури хроматину для обстеженої хворий:
CompIOD1 - 4932,3; CStdOD2 - 0,9779; IOD - 129710;
PERIMETR - 469,76
Далі для комплексної оцінки був розрахований показник DF = - 1,90529.
Значення показника DF <0, отже, у хворої виявлені зміни структури интерфазного хроматину, відповідні доброякісним процесам (ПЕ) ендометрія, що повністю збігається з даними клінічних та лабораторних досліджень.
Приклад 2.
Хвора Г., 61 рік, N історії хвороби - 1843 31 ГКБ.
Надійшла в гінекологічне відділення 31 ГКБ зі скаргами на мажучі кров'яні виділення зі статевих шляхів.
Клінічний діагноз: Поліп ендометрія?
За допомогою запропонованого способу досліджується структура хроматину залізистих клітин ендометрія хворий (див. Приклад 1). Показники структури хроматину для обстеженої хворий:
CompIOD1 - 4020,12; CStdOD2 - 0,698019; IOD - 108930; PERIMETR - 528,769
Для комплексної оцінки був розрахований показник DF = - 2,63184.
Значення показника DF <0, отже, виявлені зміни структури хроматину відповідають змінам при доброякісних процесах (ПЕ) ендометрія.
Приклад 3.
Хвора С., 51 рік, N історії хвороби - 2640, 31 ГКБ. Надійшла в стаціонар зі скаргами на порушення менструальної функції (нерегулярні менструації із затримками до 2 місяців).
В анамнезі - двічі проводилося діагностичне вишкрібання матки з приводу кровотечі, раніше діагностовано поліп і залозиста гіперплазія ендометрію.
Поряд з клінічним обстеженням при діагностичному вискоблюванні зроблені відбитки і вивчені зміни структури интерфазного хроматину залізистих клітин ендометрія (див. Приклад 1).
Показники структури хроматину для обстеженої хворий:
CompIOD1 - 7228,66; CStdOD2 - 0,870088; IOD - 115035; PERIMETR - 493,088
Далі для комплексної оцінки був розрахований показник DF = -1,90041.
Значення показника DF <0, отже, виявлені зміни структури хроматину відповідають змінам при доброякісних процесах (ЖГЕ) ендометрія, що підтверджено клініко-лабораторними дослідженнями.
Приклад 4.
Хвора К., 47 років, N історії хвороби - 2823, 31 ГКБ.
Надійшла зі скаргами на сильну кровотечу з статевих шляхів вперше.
Клінічний діагноз: Дисфункциональное маткова кровотеча пременопаузального періоду, аденоміоз.
Використання запропонованого способу були визначені такі показники структури хроматину залізистих клітин ендометрія (див. Приклад 1):
CompIOD1 - 11069,9; CStdOD2 - 0,823681; IOD - 149059; PERIMETR - 565,161
Розрахований показник DF дорівнював - 0,3716.
Значення показника DF <0, отже, виявлені зміни структури интерфазного хроматину характерні для доброякісних процесів (ЖГЕ) ендометрія, що підтверджено гістологічним дослідженням слизової матки.
Приклад 5.
Хвора Ф., 64 років, N історії хвороби - 6274, 31 ГКБ.
Скарг при вступі немає. Постменопауза, 10 років. Спадковість обтяжена: у бабусі і матері - рак матки. З анамнезу: двічі проводилося вишкрібання слизової матки і видалення поліпів ендометрія. У стаціонарі дослідження виявило потовщення ендометрія. Зроблені гістероскопія і роздільне діагностичне вишкрібання слизової матки, при цьому виявлено тонкий ендометрій і слиз. Гістологічно: дрібні шматки гіпопластичного ендометрія.
За допомогою запропонованого способу досліджувалася структура хроматину залізистих клітин ендометрія (див. Приклад 1).
Показники структури хроматину для обстеженої хворий:
СоmpIOD1 - 5154,77; CStdOD2 - 0,847275; IOD - 102923; PERIMETR - 574,834
Далі для комплексної оцінки був розрахований показник DF = -1,39052.
Значення показника DF <0, отже, виявлені зміни структури хроматину відповідають змінам при доброякісних змінах (АЕ) слизової матки.
Приклад 6.
Хвора Д., 51 рік, N історії хвороби - 6888, 31 ГКБ.
Надійшла зі скаргами на кровотечу з статевих шляхів на тлі 2 років постменопаузи.
Клінічний діагноз: Дисфункциональное маткова кровотеча постменопаузального періоду.
В анамнезі - вироблялося діагностичне вишкрібання матки з приводу кровотечі.
Поряд з клінічним обстеженням при діагностичному вискоблюванні зроблені відбитки і вивчені зміни структури интерфазного хроматину залізистих клітин ендометрія (див. Приклад 1):
СоmрIOD1 - 5202,47; CStdOD2 - 0,542494; IOD - 113359; PERIMETR - 459,794
Розрахований показник DF дорівнював - 3,89064.
Значення показника DF <0, отже, виявлені зміни структури интерфазного хроматину характерні для доброякісних процесів ендометрія.
Клініко-лабораторне дослідження підтвердило наявність у хворої кровотечі на тлі атрофії ендометрія.
Приклад 7.
Хвора Г., 69 років, N історії хвороби - 3942, 31 ГКБ.
Надійшла зі скаргами на кров'яні виділення зі статевих шляху на тлі 19 років менопаузи.
З анамнезу - з 1988 р після двосторонньої мастектомії отримувала променеву терапію і тривало тамоксифен. Двічі вироблялося діагностичне вишкрібання слизової матки з приводу маткових кровотеч.
Діагноз при поступленні: Поліп ендометрія, міома матки.
У стаціонарі проведена гістероскопія і діагностичне вишкрібання, при яких виявлено поліп ендометрія.
За допомогою запропонованого способу досліджувалася структура хроматину залізистих клітин ендометрія (див. Приклад 1).
Показники структури хроматину для обстеженої хворий:
CompIOD1-17148,5; CStdOD2 - 1,04596; IOD - 160650;
PERIMETR - 574,917
Далі для комплексної оцінки був розрахований показник DF = 1,53916.
Значення показника DF> 0, отже, виявлені зміни структури хроматину відповідають змінам при раку ендометрія.
Під час гістологічного дослідження видаленого поліпа виявлені ділянки малігнізації за типом високодиференційований аденокарциноми. Хворий вироблено оперативне лікування.
Приклад 8.
Хвора М., 54 роки, N історії хвороби - 5582, 31 ГКБ.
Надійшла в стаціонар зі скаргами на кров'яні виділення зі статевих шляхів, пременопауза 6 місяців.
За допомогою запропонованого способу проведено дослідження структури интерфазного хроматину залізистих клітин ендометрія (див. Приклад 1).
Показники структури хроматину для обстеженої хворий:
CompIOD1 - 14652,5; CStdOD2 - 0,918475: IOD - 177132; PERIMETR - 6 06,035
Далі для комплексної оцінки був розрахований показник DF = 1,24863
Значення DF> 0, отже, виявлені зміни структури хроматину відповідають змінам при раку ендометрія.
Клінічно при гістероскопії і діагностичному вискоблюванні виявлена залозиста тканина, що розпадається під струмом вводиться в порожнину матки рідини. Гістологічне дослідження виявило високодиференційовану аденокарциному ендометрія.
Таким чином, клінічне обстеження хворої підтвердило наявність у хворої раку ендометрія.
Збіг результатів проведених тестів за допомогою запропонованого способу і клініко-лабораторних досліджень свідчить про специфічність способу діагностики гіперпластичних процесів і раку ендометрія.
Таким чином, у порівнянні з прототипом запропонований спосіб діагностики гіперпластичних процесів і раку ендометрія дозволяє:
1. значно прискорити діагностичну процедуру;
2. використовувати спосіб широко в практичній медицині при обстеженні великих груп населення, забезпечуючи хорошу відтворюваність результатів цітодіагностіческого аналізу, за рахунок поліпшення якості препарату;
3. підвищити точність діагностики гіперпластичних процесів і раку ендометрія.
ВИКОРИСТОВУВАНА ЛІТЕРАТУРА
1. Бохман Я.В. Керівництво по онкогінекологіі.- Медицина, Ленінград.-1989. с. 68-75, 275-336.
2. Бреусенко В.Г. Патологія ендометрія в періоді постменопаузи (Патогенез, клініка, діагностика, терапія) Дисс. докг. мед. наук .: Москва, 1989.
3. Hoffken H., Hemmersbach E., Hebeirling D., Leppien G.- Moglichkeiten und Grenzen der konventionellen Differentiol - diagnostik am Endometrium.- Zentralbl Gynakol., 1984, 106,7, 421-430.
4. Ганіна К.П. Цитогенетична діагностика в онкоморфологів. Київ: Наукова Думка. 1980.-176 с.
5. Ferenczy A. Cytodynamics of endometrial hyperplasia and neoplasia.- Part 2: in vitro DNA histodutoradiography.- Hum. Pathol., 1983, 14, 1, 77-82.
6. Zhukotsky AV, Kogan EM: Automated analysis of chromatin structure in interphase cell nuclei. Sov. Med. Rev. B. Physicochem. Asp. Med. Vol.2, 25 - 77, 1989.
7. Бойко Ю.В. Морфофункціональні особливості хроматину інтерфазних ядер епітеліальних клітин при гіперплазії і раку ендометрія. Канд. дис. Київ. 1990.
8. Новік В.І., Агроскин Л.С., Папая Г.В., Соловйова Л.В. Біометричні дослідження в цитоморфологічної діагностиці патології ендометрія. Фіз. Онкологія. Том 12, N. 2, 30 - 33, 1990.
9. Пірс Е. Гістохімія.-М., 1962, с. 190 - 192, 746.
10. Афіфі А., ейзен С. Статистичний аналіз: підхід з використанням ЕОМ. Пер. з англ. - М .: Світ, 1982, - 488 с.
ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
Спосіб діагностики гіперпластичних процесів і раку ендометрія шляхом цитологічного аналізу взятих у хворих клітин ендометрія і дослідження гетерофазного хроматину ядер клітин, що відрізняється тим, що беруть відбитки клітин ендометрія, проводять рібонуклеазную обробку, фарбують галлоціанін-хромовими галуном, укладають в канадський бальзам, мікроденсітометріруют інтерфазна хроматин залізистих клітин ендометрія і на підставі отриманих параметрів - Comp10D1 - інтегральна оптична щільність гетерохроматина, CStd OD2 - середньоквадратичне відхилення оптичної щільності гетерохроматина, 10 - інтегральна оптична щільність хроматину ядра, PERIMETR - периметр ядра розраховують діскріменантную функцію DF
DF = 0,00013 Ч Comp10D1 + 3,98725 Ч CStdOD2 + 0,00001 Ч 10D + 0,01213 Ч PERIMETR - 13,4409,
і при позитивному значенні показника DF діагностують рак ендометрія, при негативному - доброякісні процеси ендометрія.
Версія для друку
Дата публікації 27.03.2007гг
Коментарі
Коментуючи, пам'ятайте про те, що зміст і тон Вашого повідомлення можуть зачіпати почуття реальних людей, проявляйте повагу та толерантність до своїх співрозмовників навіть у тому випадку, якщо Ви не поділяєте їхню думку, Ваша поведінка за умов свободи висловлювань та анонімності, наданих інтернетом, змінює не тільки віртуальний, але й реальний світ. Всі коменти приховані з індексу, спам контролюється.